Basic HTML Version
分子植物育种
(
网络版
), 2014
年
,
第
12
卷
,
第
1001
-
1007
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2014, Vol.12, 1001
-
1007
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
Copyright © 2014 5
th
Publisher 1001
研究报告
Research Report
凤丹
SRAP-PCR
反应体系的优化
李健
1,2
,
胡永红
2
,
秦俊
1
,
韩继刚
2
,
刘炤
2
,
蒲立栋
1
,
奉树成
1
1.
上海植物园
,
上海
, 200231
2.
中国科学院上海辰山植物科学研究中心
,
上海辰山植物园
,
上海
, 201602
通讯作者：
846058770@qq.com
；
作者
分子植物育种
, 2014
年
,
第
12
卷
,
第
1
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2014.12.0001
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用
,
版权所有人允许并同意第三方无条
件的使用与传播。
引用格式
(
中文
)
：
李健等
, 2014,
凤丹
SRAP-PCR
反应体系的优化
,
分子植物育种
(online), 12(1): 1001-1007 (doi: 10.5376/mpb.cn.2014.12.0001)
引用格式
(
英文
)
：
Li et al., 2014, Optimization of SRAP-PCR Reaction System of
Paeonia ostii
, Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding), 12(1):
1001-1007 (doi: 10.5376/mpb.cn.2014.12.0001)
摘
要
本研究采用
L
16
(4
5
)
正交试验设计，结合单因子试验对‘凤丹’
SRAP
反应体系中的
5
个主要因素进行了优化
,
并
确立了‘凤丹’
(
Paeonia ostii
) SRAP-PCR
的最佳反应体系。‘凤丹’的
SRAP-PCR
最佳反应体系为：反应体系总体积
20 μL
，
含
1.000 U Taq
聚合酶浓度
, 60 ng
模板
DNA, 1.500 mmol/L Mg
2+
，
0.250 mmol/L dNTPs
，
0.500 μmol/L
引物及
10×PCR Buffer
。
通过优化的
SRAP-PCR
反应体系共筛选了
120
对多态性丰富、条带清晰的引物组合，为牡丹图谱的构建奠定了基础。
关键词
‘凤丹’
; SRAP-PCR;
正交实验设计
;
反应体系优化
Optimization of SRAP-PCR Reaction System of
Paeonia ostii
Li Jian
1,2
, Hu Yonghong
2
, Qin Jun
1
, Han Jigang
2
, Liu Zhao
2
, Pu Lidong
1
, Feng Shucheng
1
1. Shanghai Botanical Garden, Shanghai, 200231, P.R. China
2. Shanghai Chenshan Plant Science Research Center, Chinese Academy of Sciences, Shanghai Chenshan Botanical Garden, Shanghai, 201602, P.R. China
Corresponding author, 846058770@qq.com;
Authors
Abstract
In this research, the orthogonal experiment design L
16
(4
5
) combing with single factor experiment were used to
optimize the five major factors in
Paeonia ostii
SRAP reaction system, and the optimized SRAP-PCR reaction system for
Paeonia
ostii
was also established. The optimal SRAP-PCR reaction systemwas as follows: total volume 20 μL, containing 1.000 U Taq DNA
polymerase, 60 ng template DNA, 1.500 mmol/L Mg
2+
, 0.250 mmol/L dNTPs, 0.500 μmol/L primer, and 10×PCR buffer. 120 primer
pairs with rich polymorphisms and clear bands were screened by the optimal SRAP-PCR reaction system, which will provide the
basis for the construction of genetic linkage map for
Paeonia ostii.
Keywords
Paeonia ostii
; SRAP-PCR; Orthogonal experiment design; Optimization of reaction system
研究背景
牡丹归芍药科
(Paeoniaceae)
芍药属
(Paeonia)
牡
丹组
(Sect. Mutan DC)
，一直以来都是作为中国特产
的重要观赏植物和药用植物而广为人知，并得到人
们的喜爱。近年来，牡丹籽油提取和成分分析的研
究发现，牡丹籽具有较高的出油率，牡丹籽油具有
较高的营养价值，特别是其亚麻酸含量远远高出了
目前主要的食用植物油
(
邓瑞雪等
, 2010;
李凯等
,
2012)
。因此，牡丹有望成为集观赏价值、药用价值
和油用价值为一身的重要经济植物。
中国牡丹主
要有中原、西北、江南和西北四大品种群
，
而江南
牡丹品种群中的‘凤丹’系列，是以杨山牡丹
(
Paeonia ostii
)
为主发展演化而来的品种
(
李嘉珏等
,
2011)
，具有适应性强，对土壤条件要求不高，栽培
管理相对粗放，且结实率较高的特点，成为目前国
内主要的的药用和油用栽培牡丹品种。
近十多年来，
RAPD
、
SSR
、
ISSR
、
AFLP
和
SRAP
等分子标记技术已逐渐应用于牡丹种质资
源分类鉴定
(Hosoki et al., 1997;
索志立
, 2008)
、亲
收稿日期：
2014
年
01
月
07
日
接受日期：
2014
年
01
月
08
日
发表日期：
2014
年
02
月
25
日
基金项目：本研究由上海市科学技术委员会和上海市绿化
局
(11ZR1436100, 11391901101, F122431)
资助
分子植物育种
F
enzi Zhiwu Yuzhong