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高利军等
:
水稻
Wx
基因的功能标记开发及有效性验证
1093
2
讨论
本研究用新建立的蜡质基因的功能标记
M-Wx
对
72
份水稻材料进行了检测，在正常
PCR
条件下
扩增完成后直接进行
1.2%
的琼脂糖凝胶电泳，
72
份材料均有条带，且条带清晰，能准确辨别亲本为
GG
型或
TT
型。相较于前人建立的两种功能标记而
言，操作简便、经济，符合水稻育种的大批量检测。
目前主栽三系杂交稻亲本中，三系保持系的直
链淀粉偏高，这是导致目前三系杂交稻米质差的一
个因素。以蜡质基因
Wx
基因型为
TT
的三系保持
系宜香
B
、粤丰
B
等为材料，利用标记
M-Wx
可以
应用于选育低直链淀粉的三系保持系。本课题组将
该功能标记
M-Wx
用于水稻三系不育系的育种实
践，选育了一批低直链淀粉的不育系，其中一个不
育系命名为
62A
测配杂交组合表现优异，所配的杂
交组合
62A/
辐恢
838
已经通过广西区试筛选实验，
进入复试
(
未发表
)
。从本课题组的育种实践看，
M-Wx
标记对检测样品出带率高，条带清晰，符合
水稻育种的大批量检测的需求。
3
材料与方法
3.1
供试材料
供试材料是广西常用的遗传稳定的
72
份水稻亲
本材料
(
表
2)
。
3.2
水稻亲本直链淀粉的测定
供试材料于
2010
年早稻统一种植在广西农科院
试验田，成熟后收获。按国家标准
(GB/T15683-1995)
在广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室测
定稻米直链淀粉。
3.3
水稻基因组
DNA
提取
待到
72
份水稻亲本材料插秧后
20 d
，分别取
其叶片，置于-
20
℃冰箱保存。基因组
DNA
的提取
按
Murray
和
Thompson
(1980)
的
CTAB
法进行。
3.4 PCR
扩增
PCR
反应体系采用
10 μL
的体系，含
1.0 μL
10×Buffer
，
0.2 μL dNTP
，三种引物各
0.5 μL 4 mol/L
，
0.1 μL
Taq
酶，
1.0 μL
模板
DNA
，
ddH
2
O
补足
10 μL
。
配置反应体系的过程均在冰上操作，待
PCR
反应
温度上升到
94
时才将
PCR
板放入
PCR
仪进行扩
增，以减少引物二聚体的形成。
PCR
反应程序
94
℃
5 min
，然后
35
个循环
94
℃
30 s
，
55
℃
30 s
，
72
℃
45 s
，最后
72
℃延伸
10 min
。
PCR
扩增产物用
1.2%
琼脂糖凝胶中电泳，
GelRed
生物染剂染色，紫外灯
下观察拍照。
作者贡献
高利军是本研究的实验设计和实验研究的执行人；周
萌、陈仁天完成数据分析，论文初稿的写作；高汉亮、颜群
和戴高兴负责稻米直链淀粉的测定；周维永和梁海福参与实
验设计，试验结果分析；邓国富是项目的构思者及负责人，
指导实验设计，数据分析，论文写作与修改。该文为全体作
者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由广西
“
八桂学者
”
专项、
“
十二五
”
国家科技计
划课题
(2012AA101201-2)
、国家国际科技合作项目专项
(2012DF131220)
、 广 西
“
十 二 五
”
科 技 攻 关 项 目
(20100005-2)
、 广西自然科学基金
(2010GXNSFA013085)
和
广西农科院基金
(201013
）共同资助。感谢李映照研究员为
本研究提供部分水稻材料。
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