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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1049
-
1060
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1049
-
1060
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1051
图
3
荧光引物与常规引物的扩增产物
注
: A:
引物
txp228
未启动扩增
; B:
引物
cup63
扩增无多态
性
; 1~10; 11~20:
依次为荧光引物和常规引物扩增产物
Figure 3: The amplification fragments for fluorescent primer
and conventional primer
Note: A: Amplification failure for primer txp228; B: No
polymorphism for primer cup63; 1~10 and 11~20 are amplified
fragments for fluorescent primer and conventional primer,
respectively
2
讨论
核心引物的筛选确立是
SSR
标准实验体系的
重要组成部分，也是
SSR
指纹鉴定商业化的关键环
节，对于高梁
DNA
指纹库的构建具有重要意义。
核心引物的确立，不但降低了合成引物的成本，而
且大大减轻了引物筛选的工作量，并使得不同研究
者的指纹图谱可以相互比较和整合。赵久然等
(2003)
早已筛选确立适用于玉米自交系和杂交种指纹图
谱绘制的
SSR
核心引物，并成功应用于玉米品种
DNA
指纹数据采集、品种产权纠、品种审定等方面。
然而，在高粱
DNA
指纹库构建的核心
SSR
引物筛
选方面的相关报道较少。
詹秋文等
(2008)
以
42
份高粱和苏丹草为试材，从
95
对
SSR
引物中最终筛选出
3
对
SSR
核心引物，
构建
42
份高粱和苏丹草的
SSR
数字指纹。王黎明
等
(2011)
以国内外
142
份甜高粱种质资源为试材，
从
103
对
SSR
引物中筛选出
41
对多态性引物，并
最终确定
11
对引物用于构建
142
份品种资源的分
子身份证。然而，詹秋文等
(2008)
研究中的材料和
引物数量均较少，而王黎明等
(2011)
主要针对国内
外甜高粱种质。本研究所选用的
119
份高粱种质包
含地方品种、常规种
(
含有国外种质、保持系和恢复
系
)
和杂交种等在内的全部品种类型；所选用的引物
涵盖目前国内外最新研究中所开发和使用的核心
引物；引物筛选标准较为严格，包括在染色体上分
布均匀，扩增带型清晰、稳定且多态性水平高；既
适合利用普通
DNA
片段检测技术平台
(
如变性聚丙
烯酰胺凝胶结合银染技术
)
，又适合高通量
DNA
片
段检测技术平台
(
如
DNA
测序仪
)
检测；此外，还兼
顾扩增片段大小适中、易于进行多重
PCR
等原则。
图
4 41
对引物在高粱染色体上的分布图
Figure 4 The distribution of 41 primers among 10 chromosomes of sorghum