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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1032
-
1037
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1032
-
1037
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1033
C16:0
的生成
(Dormann et al., 1994)
。在榆树、椰子
和棕榈等富含中链脂肪酸的植物中，
8:0-ACP
、
10:0-ACP
、
12:0-ACP
硫酯酶和
14:0-ACP
硫酯酶
(Salas and Ohlrogge, 2002)
大量存在。
花生是重要的油料作物，花生中脂肪酸的合成
是由一系列位于质体和线粒体的脂肪酸合成酶催
化完成的
(Voelker and Kinney, 2001; Mekhedov and
Ohlrogge, 2000)
。花生种子脂肪酸合成的最后一步，
在酰基
ACP
硫酯酶的催化作用下，生成游离的脂肪
酸和酰基载体蛋白
ACP
。酰基
ACP
硫酯酶具有链的
长度特异性
(Ghosh et al., 2007)
，所以它的活性影响
着花生脂肪酸合成产物中各种脂肪酸之间的比率。
本文采用
PCR
扩增技术克隆得到了花生中乙酰
ACP
硫酯酶基因
(
AhfatB
)
全长
DNA
序列，比较了
AhfatB
序列与蓖麻、向日葵等其他作物中该基因序
列的同源性，并将克隆片段与
PBI121
表达载体
35S
启动子连接，构建
PBI121-
AhfatB
表达载体。为进一
步研究
AhfatB
的特性及进行基因转化提供了理论依
据及准备材料。
1
结果与分析
1.1
AhfatB
全长
DNA
序列的克隆
以 山 花
7
号 叶 片
DNA
为 模 板 ， 用 引 物
AhfatB-1/AhfatB-2
进行
PCR
扩增。扩增产物经电泳
检测，片段长度大于目的片段
1 486 bp (
图
1)
。推测
基因内有内含子存在。
以花生叶片
DNA
为模板，用引物
AhfatB
-3/
AhfatB
-4
进行
PCR
扩增。
PCR
扩增产物电泳检测，片
段长度与目的片段长度
739 bp
大小相符
(
图
2)
，推测
此片段内无内含子存在。
继续在其他片段设计引物，拼接得到花生中
AhfatB
基因全长
DNA
序列
(
图
3)
。序列全长
2 720 bp
，编
码区位于
124 bp~2 341 bp
，开放阅读框全长
1 242 bp
，
基因内存在
3
个内含子。
图
1
花生
AhfatB
基因
PCR
产物电泳图
注
: M: DNA marker DL2000; 1~ 5: PCR
产物
Figure 1 Electrophoresis of PCR products of
AhfatB
of Peanut
(
Arachis hypogaea
L)
Note: M: DNA marker DL2000; 1~5: PCR produt
图
2
花生
AhfatB
基因
PCR
产物电泳图
注
: M: DNA marker DL2000; 1: PCR
产物
Figure 2 Electrophoresis of PCR products of
AhfatB
of Peanut
(
Arachis hypogaea
L.)
Note: M: DNA marker DL2000; 1: PCR product
图
3
花生中
AhfatB
基因
DNA
全序列
注
:
黑色阴影
:
起始密码子和终止密码子
;
灰色阴影
:
外显
子
;
白色区域
:
内含子
Figure 3
The full-length DNA sequence of
AhfatB
of Peanut
(
Arachis hypogaea
L)
Note: The black shadow: Initiator codon and terminator codon;
The gray shadow: Extron; The white sector: Intron