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分子植物育种(网络版), 2012 年, 第 10 卷, 第 1214- 1217 页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1214- 1217
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表 1 不同方法提取总 RNA 纯度检测
Table 1 Yield and purity of RNA isolated from different organ in populus with different methods
提取方法 植物器官 OD260/OD280 OD260/OD230 浓度(ng/µL)
Method Organ Concentration (ng/µL)
天根
RNAplant plus Reagent 叶片 1.67 1.42 139.7
试剂盒 Leaf
RNAplant plus Reagent
天泽柱式植物 RNAout 叶片 2.08 2.03 211.3
Column RNAout Leaf
改良 SDS 法 叶片 2.01 2.04 403.5
Modified SDS method Leaf
天根
RNAplant plus Reagent 根 1.26 1.18 263.4
试剂盒 Root
RNAplant plus Reagent
天泽柱式植物 RNAout 根 1.83 2.24 311.6
Column RNAout Root
改良 SDS 法 根 1.91 1.83 372.5
Modified SDS method Root
因此含有多糖的 RNA 无法用于分子生物学研究
(Fang et al., 1992)。本研究中进行了部分改良，采用
LiCl 沉淀剂选择性沉淀 RNA 来减少多糖；另外，
选择短时间沉淀(如 3 min)以减少非 RNA 沉淀。但
是，RNA 样品中仍然存在基因组 DNA，需进行无
RNase 的 DNase 处理，再进行其他试验。
本试验经琼脂糖凝胶电泳和 RT-PCR 检测分
析，证明了改良 SDS 法完全适用于盐胁迫下杨树总
RNA 提取，为后续分子生物学研究奠定了基础。
3 材料与方法
3.1 材料
将 1 年生 107 杨截成长约 15 cm 的茎段，置于
盛有蒸馏水的塑料容器中，不定期更换蒸馏水，以
防茎段分泌出的粘液影响生根。待根长至 5 cm 左
右时，将茎段转移至含有 0.6% NaCl 的 Hoagland
营养液中胁迫 6 h，用去离子水冲洗根部，然后用
滤纸吸干根表面水分，迅速剪取叶片和根，用液氮
速冻后置于-80℃冰箱保存。
柱式植物 RNAout 购自天泽公司，RNAplant
plus Reagent 试剂盒购自天根公司，改良 SDS 法药
品均为自己配制，反转录试剂盒购自 Promega 公司，
引物由北京鼎国公司合成。所需试剂(除含 Tris 试剂
外)用 0.1% DEPC 于 37 ℃烘箱处理 24 h 后进行高压
灭菌。所需的研钵等玻璃制品于 180℃干热处理 12 h，
以避免 RNA 酶污染。无 DNase 和 RNase 移液器枪
头和 Eppendrof 管购自 Axygen 公司。
改良 SDS 提取液： 100 mmol/L Tris-HCl，
500 mmol/L NaCl，50 mmol/L EDTA ，2.0% SDS，
100 mmol/L DTT，5% 2-β 巯基乙醇，pH=7.5 (其中
巯基乙醇在使用前加入提取液中至终浓度 5%)。
3.2 总 RNA 提取方法
3.2.1 柱式植物 RNAout 方法
称 100 mg 的叶片和根，经液氮研磨后，按试
剂盒操作步骤说明进行 RNA 提取。
3.2.2 RNAplant plus Reagent 试剂盒方法
称取 100 mg 的叶片和根，经液氮研磨后，按
试剂盒操作步骤说明的方法提取。
3.2.3 改良 SDS 法
取 100 mg 叶片和根置液氮冷冻研磨成粉，迅
速置入盛有 350 µL 水饱和酚、350 µL 氯仿和 700 µL
SDS 提取液的 Eppendorf 管中，涡旋震荡 5 min 后
于 4℃ 12 000 r/min 离心 10 min；上清转入盛有
700 µL 氯仿的新 Eppendorf 管，震荡混匀，于 4 ℃
12 000 r/min 离心 10 min；上清转入盛有 1/4 体积的
8 mol/L LiCl 溶液，常温沉淀 5 min；4℃ 12 000 r/min
离心 10 min；弃上清，用 75%乙醇洗沉淀 2 次，最
后短暂离心吸出多余液体，置于真空浓缩仪干燥，
加入 DEPC 处理过的 H2O 中溶解 RNA，于-80℃保
存，备用。