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张作青等
, 2011,
转
il-4
基因大白菜
(
Brassica Pekinensis
Rupr.)
分子检测及遗传和表达研究
,
分子植物育种
Vol.9 No.42 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0042)
1319
功能是增强
B
细胞对
T
细胞的相互作用及促进
IgE
介导的免疫应答反应。另外，
IL-4
在过敏性和感染
性及自身免疫性疾病、肿瘤等方面都具有重要的医
疗价值。
本实验室利用花粉管通道法将
il-4
基因转入大
白菜中，对其自交后代
T
6
代植株进行分子生物学活
性检测和遗传表达研究。试图为今后进一步利用转
il-4
基因大白菜提供参考。
1
结果与分析
1.1
转
il-4
基因大白菜
T
6
代幼苗的
PPT
抗性筛选
按照品种的不同，对
T
5
代种子
4
℃春化处理
30
d
后，播于温室
288
孔育苗盘中，共播
T
5
代种子
1413
粒，获得
T
6
代幼苗
935
株；经
PPT
抗性筛选，反
应
10 d
左右后淘汰叶片枯黄死亡的植株
(
图
1)
，共
获得具
PPT
抗性阳性植株
588
株
(
表
1)
。
图
1
转
il-4
基因大白菜
T
6
代幼苗的
PPT
抗性筛选
注
: A:
喷洒
PPT
之前
; B:
喷洒
PPT 10
天后
Figure 1 PPT resistance selections of
il-4
transgenic Chinese
cabbage (T
6
generation)
Note: A: Before spraying PPT; B: After spraying PPT for ten
days
表
1
转基因大白菜
T
6
代检测结果
Table 1 Examination results of transgenic plants in T
6
generation
PPT
筛选
PPT Selection
il-4
扩增
il-4
gene Detection
品种
Variety
转化处理组合
Treatment
combination
待测株数
Numbers of
detection
阳性株数
Numbers of
Resistant plants
阳性率
(%)
Positive rate
of plants (%)
阳性株数
Numbers of
positive plants
阳性率
(%)
Positive rate of
plants (%)
H2
AH
187
100
53.48
16
8.56
BH
148
92
62.16
2
1.35
XSJ
BL
179
116
64.80
1
0.56
W6
AH
421
280
66.51
26
6.18
总计
Numbers of total
935
588
62.89
45
4.81
1.2
转
il-4
基因大白菜
T
6
代幼苗的
PCR
检测
分别以
rbcl
和
il-4
基因特异性引物对
T
6
代大白
菜幼苗进行内对照和
il-4 PCR
检测，分别得到了大
小为
433 bp
和
243 bp
的特异性条带
(
图
2)
，共获得
il-4
阳性植株
45
株
(
表
1)
。阳性率仅为
4.81%
，远远低于
孟德尔定律理论值
75%
。
1.3
转
il-4
基因大白菜的
PCR-Southern
杂交
PCR-Southern
杂交结果表明，阳性对照
(
质粒
)
与
7
个
PCR
三次阳性样品中的
6
个出现杂交信号，
1
号
空白和
10
号阴性对照没有条带。
PCR
检测结果无
污染，初步证明
il-4
基因已经整合到大白菜基因组
中
(
图
3)
。
1.4
转
il-4
基因大白菜的
Western
杂交
为进一步确证
il-4
基因在大白菜中的表达，对
部分
PCR-Southern
杂交呈阳性的样品进行
Western
杂交，结果在
PVDF
膜上出现杂交条带
(
图
4)
，大小
与
IL-4
标准蛋白一致
(
约
15 KD)
，阴性对照样品无杂
交条带。通过
Western
杂交结果，进一步验证了上述
PCR
、
PCR-Southern
杂交结果的可靠性。同时证明
il-4
基因能够在转基因大白菜中正常表达。