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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1182
-
1188
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1182
-
1888
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1182
技术主题
Technology Feature
刺槐
SRAP-PCR
反应体系优化及引物筛选
袁存权
1
,
李允菲
1
,
杨妮娜
1
,
戴丽
1
,
胡瑞阳
1
,
孙鹏
1
,
李云
1
,
荀守华
2
1.
林木育种国家工程实验室
,
林木、花卉遗传育种教育部重点实验室
,
国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室
,
北京林业大学生物科学
与技术学院
,
北京
, 100083
2.
山东省林业科学研究院
,
济南
, 250014
通讯作者
:
yunli63@163.com
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
25
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0025
收稿日期：
2011
年
01
月
06
日
接受日期：
2011
年
02
月
28
日
发表日期：
2011
年
03
月
04
日
这是一篇采用
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,
版权所有人允许并同意第三方无条
件的使用与传播。
引用格式：
袁存权等
, 2011,
刺槐
SRAP-PCR
反应体系优化及引物筛选
,
分子植物育种
Vol.9 No.25 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0025)
摘
要
利用
L
16
(4
5
)
正交试验设计结合单因素试验对刺槐
SRAP-PCR
反应体系中的主要成分进行优化，建立了一套适
用于刺槐的
SRAP-PCR
反应体系。优化的
25 µL SRAP-PCR
反应体系中各主要组分的最适含量为：
Mg
2+
2.5 mmo1/L
，
dNTPs 0.2 mmol/L
，
Taq
DNA
聚合酶
1.5 U
，
primer 0.3µmol/L
，模板
DNA 30 ng
。用
8
份刺槐不同材料
DNA
验证优化体系，
结果显示，反应体系的稳定性和可靠性较好。利用优化的
SRAP-PCR
反应体系，从
169
对
SRAP
引物组合中筛选出扩增条
带清晰，重复性好以及多态性丰富的引物
35
对。这一优化体系的建立将为利用
SRAP
标记技术进行刺槐种质资源遗传多样
性分析、指纹图谱构建以及刺槐分子标记辅助育种研究奠定基础。
关键词
刺槐
; SRAP-PCR;
体系优化
;
引物筛选
Optimization of SRAP-PCR Reaction System and Selection of Primers for
Robinia pseudoacacia
L.
Yuan Cunquan
1
, Li Yunfei
1
, Yang Nina
1
, Dai Li
1
, Hu Ruiyang
1
, Sun Peng
1
, Li Yun
1
, Xun Shouhua
2
1. National Engineering Laboratory for Tree Breeding, Key Laboratory of Genetics and Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants, Ministry of Education,
The Tree and Ornamental Plant Breeding and Biotechnology Laboratory of State Forestry Administration, College of Biological Sciences and Biotechnology,
Beijing Forestry University, Beijing, 100083, P.R. China
2. Shandong Provincial Academy of Forestry, Jinan Shandong, 250014, P.R. China
Corresponding author, yunli63@163.com;
Authors
Abstract
To construct the optimum SRAP-PCR reaction system of
Robinia pseudoacacia
L., L
16
(4
5
) orthogonal experimental
design combined with single factor test were used. The results showed that the optimal reaction system was 25 µL total reaction
system containing 2.5 mmo1/L Mg
2+
, 0.2 mmol/L dNTPs, 1.5 U
Taq
DNA polymerase, 0.3 µmol/L each primer and 30 ng temple
DNA. Using 8
Robinia pseudoacacia
L materials to test this optimized SRAP system, the results showed that the established system
not only steady but also reliable. 35 primer pairs which had clear, reproducible banding patterns and good polymorphism were
selected from 169 SRAP primer pair combinations based on their stable amplification. This work is a foundation for applying SRAP
markers to evaluation of genetic diversity, construction of fingerprinting and molecular marker assisted breeding for the
Robinia
pseudoacacia
L.
Keywords
Robinia pseudoacacia
L.; SRAP-PCR; Optimization of system; Selection of Primers
研究背景
刺槐
(
Robinia pseudoacacia
L.)
，属蝶形花科
(Fabaceae)
或豆科
(Leguminosae)
蝶形花亚科
(Papilio-
noideae)
刺槐属
(Robinia L.)
落叶乔木，是一种良好的
用材、水土保持、防风固沙、土壤改良和绿化树种，
此外还是一种优良的木本蜜源树种和高蛋白饲料树
种，其适生范围广、耐低温、耐干旱瘠薄、耐盐碱，
因而被广泛引种种植。刺槐于
1898
年引入我国，目前
已逐步演化为我国的一个乡土树种
(Huo et al., 2009)
。
序列扩增相关多态性
SRAP (sequence-related
amplified polymorphism)
是由
Li
和
Quiros
发明的一种
新型分子标记技术，主要对开放阅读框进行扩增，
正向和反向引物分别由
17
和
18
个碱基组成。具有在
基因组中分布均匀，多态性高，产率中等，操作简